在之后的反对朱常洛宠妃李选侍挟持太子一事中，左光斗起了很大作用，与另一位东林党人杨涟并称“杨左”。
他上书说：“内廷有乾清宫，犹外廷有皇极殿，惟天子御天得居之，惟皇后配天得共居之。其他妃嫔虽以次进御，不得恒居，非但避嫌，亦以别尊卑也。选侍既非嫡母，又非生母，俨然尊居正宫，而殿下乃退处慈庆，不得守几筵，行大礼，名分谓何？选侍事先皇无脱簪戒旦之德，于殿下无拊摩养育之恩，此其人，岂可以托圣躬者？且殿下春秋十六龄矣，内辅以忠直老成，外辅以公孤卿贰，何虑乏人，尚须乳哺而襁负之哉？况睿哲初开，正宜不见可欲，何必托于妇人女子之手？及今不早断决，将借抚养之名，行专制之实。武氏之祸再见于今，将来有不忍言者。”
这一上书，使得大臣们纷纷响应他的号召，李选侍想夺权都不能够！
之后，太子顺利继位后，他重用东林党，左光斗就此升任左都御史，负责监察百官，他的政治生涯也达到辉煌时期。
可是，朱由校即位不久后，开始疏远东林党，信任起魏忠贤来。
魏忠贤权力在手，开始胡作非为。
杨涟上了一份奏章，揭发魏忠贤二十四条罪状。
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